金秋十月，無限極舉辦的2016“道地原料溯源之旅”啟程。著名主持、國民美食家劉儀偉率養生文化愛好者、中醫藥行業專家等代表組成的百人“溯源之旅”探秘團，挺進大別山，踏上安徽岳西這片種植茯苓的優質地段，親手采挖、辨識茯苓，品嘗茯苓養生美食……親身探尋道地茯苓產地的多重樂趣。不過，茯苓產地絕不局限于安徽岳西一地，茯苓產地分布較廣，不同產地的茯苓各種成分有何差異?且聽下面分解。

  茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf 的干燥菌核，根據臨床用藥及加工商品規格，茯苓可分為四種不同的藥用部位。依據傳統中醫藥理論及茯苓的傳統加工方法，將新鮮茯苓個經發汗或冷凍后削下的黑色外皮稱“茯苓皮”，利水消腫功效最佳;茯苓皮層以下的帶色部分，削下切片干燥即為“赤茯苓”，長于滲利濕熱;菌核內部白色部分切薄片或小方塊、丁，即為“白茯苓”，擅長健脾益氣;茯苓藥材中帶有松根的部分，即為“茯神”，茯神寧心安神功效最強。茯苓藥材中化學成分主要包括多糖和茯苓酸，本文就根據不同產地分析這兩種含量。

  不同產地茯苓多糖含量評測

  茯苓中β-茯苓聚糖占茯苓藥材重量的90%以上。茯苓聚糖是一種水不溶性多糖，水解以后生成茯苓多糖及其衍生物才具有調節免疫、抗腫瘤等藥理活性，水溶性多糖少于0.3%，因此，茯苓多糖含量測定主要是測定β- 茯苓聚糖的含量。

  目前，茯苓加工以手工為主，加工工藝較為落后，茯苓藥材質量差別很大，加工的商品規格有幾十種，沒有統一標準。茯苓皮臨床用量不大，沒有得到大量的綜合開發利用，大部分作為廢料處理，造成極大浪費。本研究采用紫外分光光度法，對茯苓不同產地、茯苓藥用部位多糖含量進行比較，從而為茯苓藥材質量和商品規格等級制訂提供科學依據。

  分別取不同量已知含量的茯苓藥材粉末(過80 目篩)6 份，精密稱定，置圓底燒瓶中，分別用150mL 80%乙醇回流提取1h，趁熱過濾，殘渣用80%的熱乙醇洗滌2次，每次10mL，將殘渣及濾紙置燒瓶中，分別精密加入不同量的葡萄糖對照品，精密加入1mol·L^-1 NaOH 溶液150mL，瓶用熱水洗滌2次，每次10mL，合并濾液與洗液，放冷，加水至刻度，搖勻，即得。

  分別精密吸取供試液0.5mL 于25mL具塞試管中，加水至2.5mL，加入5.0%苯酚水溶液6.0mL，在冰水浴中緩緩加入濃硫酸至刻度，搖勻，放冷后置沸水浴中10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，放置至室溫，隨行溶劑空白，測定吸收度。結果見表1。

表1 樣品回收率試驗結果

  樣品含量測定分別取不同產地茯苓不同部位藥材粉末(過80目篩)約0.1g，精密稱定，按方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試液0.5mL 于25mL具塞試管中，加水至2.5mL，加入5.0%苯酚水溶液6.0mL，在冰水浴中緩緩加入濃硫酸至刻度，搖勻，放冷后置沸水浴中10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，放置至室溫，隨行溶劑空白，測定吸收度。結果見表2。

表2 多糖含量測定結果（n＝3）

  同藥用部位，通過對比全國八個主要茯苓產區茯苓不同藥用部位堿溶性多糖含量測定結果，發現絕大部分產地茯苓藥材，白茯苓堿溶性多糖含量均在75%以上，赤茯苓、茯苓皮堿溶性多糖變化較大，茯苓皮堿溶性多糖含量在45%以上，僅比赤茯苓的堿溶性多糖含量低一些，當作廢品丟棄可惜，應該綜合考慮。

  浸提溶劑的考察稱定2.00g合歡花粉末兩份，分別用40mL的水和60%乙醇做溶劑，于70 ℃水浴上加熱回流2h，浸提2次，合并濾液，制成供試品溶液，按操作，計算黃酮得率。結果顯示水提法黃酮平均得率為0.13% (n=3)，遠低于醇提法，并且水提法得到的樣品溶液較為渾濁，影響測定結果。故而選擇醇提法作為浸提黃酮的方法。

  浸提次數的考察稱取合歡花粉末2.00g三份分別置于燒瓶中，加入40m 的60%乙醇，于70 ℃的水浴上回流2 h，分別浸提1次、2次、3次，浸提液抽濾，合并濾液，制成供試品溶液，按操作，計算黃酮得率結果顯示黃酮得率分別為1.59% 、2.31% 、2.38% (n=3)。黃酮得率隨著浸提次數的增加而增大，但第二次浸提和第三次浸提差別不大，說明合歡花經過2次浸提，其所含的黃酮大部分被提出來了，若再提1次，黃酮得率僅稍稍提高，而溶劑消耗增加，增加了過濾濃縮等后續工作量，使成本升高，故合歡花黃酮浸提兩次比較適宜。

  安徽省大別山所產茯苓藥材白茯苓堿溶性多糖含量較其他產地高，同省不同產地白茯苓堿溶性多糖含量有明顯差異，說明茯苓藥材中白茯苓堿溶性多糖含量區域性較強，主要原因是安徽省大別山為白色砂性土，土壤含砂很大;所產茯苓質地潔白、致密、純凈，不易浸染、腐爛、串色，顏色越深，質地越松泡，腐爛、浸染，茯苓藥材中堿溶性多糖含量越低。茯苓不同藥用部位茯苓多糖含量比較，結果顯示白茯苓> 赤茯苓> 茯苓皮，并發現茯苓顏色越深，質地越松泡，腐爛、浸染，茯苓藥材中堿溶性多糖含量越低，這為臨床用藥和茯苓加工商品規格制訂和加工方法提供了科學依據。

  茯神采樣困難，筆者只收集到湖南和安徽的茯神，通過研究，結果顯示茯神多糖含量低于白茯苓，略高于赤茯苓(數據略)，推測認為茯神中白茯苓所占比例相對較少，赤茯苓和茯神木占有一定的比例，有很少一部分出現浸染、腐爛、串色。分別采用冷浸提取法、溫浸提取法、超聲提取法、回流提取法進行比較，結果發現，冷浸提取法>超聲提取法> 溫浸提取法> 回流提取法，溫度對茯苓多糖提取有較大的影響，低溫能有效增加茯苓多糖提取率，堿性條件下高溫對茯苓多糖有破壞作用，一部分多糖變成了小分子化合物，不能與苯酚- 硫酸溶液顯色，因此本試驗采用低溫冷浸法提取茯苓多糖。

  通過對比苯酚- 硫酸法和蒽酮- 硫酸法，發現采用蒽酮- 硫酸法，加熱時間對最大吸收峰有較大影響，穩定性差，這與參考文獻結論一致。苯酚- 硫酸法利用多糖類成分在硫酸作用下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚溶合成有色的化合物，且顏色穩定，此溶液在適當波長(489nm)有特征吸收，作為測定茯苓多糖含量的方法，結果準確，穩定性、重現性好。

  綜上所述，采用苯酚- 硫酸法測定茯苓不同產地、不同藥用部位多糖含量，方法穩定可行，可用于茯苓藥材質量評價。由于茯苓不同藥用部位成分含量存在差異，并與臨床療效密切相關。因此，規范茯苓不同藥用部位和加工方法，制定茯苓藥材加工商品等級的質量標準，并與三萜類成分含量、水溶性浸出物、醇溶性浸出物一起，共同準確評價茯苓藥材質量優劣，建立茯苓藥材質量標準具有重要意義。

  不同產地茯苓酸含量差異評測

  中茯苓酸是其主要有效成分之一。2015年版《中華人民共和國藥典》(一部)未收載茯苓的含量測定項。本試驗采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)對茯苓中茯苓酸進行了含量分析,建立了簡便快捷、準確可靠的含量測定方法,進一步完善了茯苓藥材的質量控制標準。

  茯苓藥材由本課題組分別采自湖南、河南、四川、浙江、貴州、安徽、湖北、廣州、福建9個地區,共9批。

  精密稱取茯苓粗粉(過60目篩)約1.0g,置于50 mL 具塞錐型瓶中,加甲醇30 mL,加塞稱定,浸泡30 min,超聲90 min,途中及結束時用甲醇補足減失的重量,冷卻,過濾;用甲醇洗滌濾渣,洗液合并于濾液中,置蒸發皿中水浴蒸干,殘留物用甲醇定容至10mL 容量瓶中,即得。

  精密稱取已知含量的樣品0.5g,共6份,分別加入一定量的茯苓酸對照品，按下方法制備并測定量,RSD=1.85%(n =6),結果見表3。

表3 加樣回收試驗結果

  取不同產地茯苓粗粉,按方法制備供試品溶液,用0.45μm 微孔濾膜過濾,濾液密封備用。分別精密吸取各供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定,并計算樣品溶液中茯苓酸的含量。結果顯示,四川西昌和湖北羅田產茯苓中茯苓酸的含量明顯高于其他產地,結果見表4。

表4 各產地茯苓中茯苓酸的含量測定結果

  經反復試驗,建立了茯苓藥材主要有效成分茯苓酸的含量測定方法,該方法重復性好,可靠性強,完善了2015 年版《中華人民共和國藥典》(一部)収載茯苓藥材的質量標準,為再版藥典補充茯苓藥材質量標準“含量測定”內容提供了依據。這對于進一步有效控制茯苓藥材的質量具有重要意義。9個產地所產茯苓中茯苓酸的含量測定表明,不同產地茯苓中茯苓酸含量有較大差異,四川西昌和湖北羅田產茯苓中茯苓酸的含量明顯高于其他產地,表明其質量品質較優。這可能與繁殖菌種和生態環境有關,值得進一步深入研究。